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小鼠免疫球蛋白M試劑盒有效期是多久?
發布時間:2020-03-16   點擊次數:137次

小鼠免疫球蛋白M(IgM)酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:0.1ng/ml - 4ng/ml

使用目的:

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中免疫球蛋白 M(IgM)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)水平。用純化的抗原包

被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白 M(IgM),再與 HRP 標記

的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB

HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中

的免疫球蛋白 M(IgM)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標

準曲線計算樣品中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)濃度。

試劑盒組成

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(8ng/ml

0.5ml×1

3

酶標包被板

12 孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑 B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行

稀釋。

4ng/ml

5 號標準品

150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2ng/ml

4 號標準品

150μl 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

1ng/ml

3 號標準品

150μl 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

0.5ng/ml

2 號標準品

150μl 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

0.25ng/ml

1 號標準品

150μl 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.

加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底

部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.

溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.

配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

6.

加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7.

溫育:操作同 3

8.

洗滌:操作同 5

9.

顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終

止液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結:

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出

標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD

值大于標準品孔D一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,

計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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