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大鼠核因子-κB(NF-κB)檢測線是多少?
發布時間:2019-12-06   點擊次數:330次

大鼠核因子-κB(NF-κB)酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍: 96T

30ng/L-800ng/L

使用目的:

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中核因子-κB(NF-κB)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠核因子-κB(NF-κB)水平。用純化的大鼠核因子-κB(NF-κB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入核因-κB(NF-κB),再與 HRP 標記的核因子-κB(N-κB)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子-κB(NF-κB)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠核因-κB(NF-κB)濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 7 終止液 6ml×1

2 酶標試劑 6ml×1 8 標準品(1600ng/L0.5ml×1

3 酶標包被板 12 孔×8 9 標準品稀釋液 1.5ml×1

4 樣品稀釋液 6ml×1 10 說明書 1

5 顯色劑 A 6ml×1 11 封板膜 2

6 顯色劑 B 6ml×1/12 密封袋 1

標本要求

1

標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.

不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行

稀釋。800ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

400ng/L 4 號標準品 150μl 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

200ng/L 3 號標準品 150μl 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

100ng/L 2 號標準品 150μl 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

50ng/L 1 號標準品 150μl 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.

加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液

40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底

部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.

配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

6.

加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3

8.

洗滌:操作同 5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘

.

10.

終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.

測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終

止液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結:

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋

倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。次加樣時間

控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD

值大于標準品孔di孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋定倍數(n 倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5封板膜只限次性使用,以避免交叉污染。

6底物請避光保存。

7嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準

.8所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1試劑盒保存:;2-8℃。

2有效期:6 個月

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